酪蛋白通常由脱脂牛奶制成(很少由酪乳制成)。
有以下三种方法制备：
1.当存在的乳酸链球菌发酵乳糖产生足够的乳酸时，酪蛋白自然变酸凝结。
2.加入稀盐酸或硫酸沉淀酸性酪蛋白。
3.对于凝乳酶酪蛋白，将温脱脂牛奶与凝乳酶提取物一起凝固，直到副酪蛋白钙凝块，然后将凝块切成小块，让乳清流出。
在所有这三种方法中，乳清被提取出来，凝乳用水清洗，排水或压制，在暖空气中干燥，研磨，包装存储。凝乳酶酪蛋白保留了牛奶中的大部分磷酸钙。